铁皮石斛种苗组织培养一次成苗技术即是用一种培养基完成种苗的整个生长过程，一般是以种子为外植体，而且适于外植体培养的种子很少，因此难以满足市场需求，接下来小编就来简单说说铁皮石斛种苗组织培养一次成苗育苗流程，希望对大家能有所帮助。

1 材料和方法

1.1 材料

挑选健康、无病虫害植株，以茎段作为外植体。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体的处理

1.2.1.1 选取长势良好、均匀、叶片繁茂的铁皮石斛材料，将其茎段从植株上剪下，去掉叶片后，剪取一定长度的带节间茎段，将其放入搪瓷缸中，再将纱布盖在搪瓷缸口，用流水冲洗20min。

1.2.1.2 之后再将洗衣粉倒在搪瓷缸里，用玻璃棒搅拌均匀，浸泡30分钟，水冲洗干净后用75%的酒精浸泡30秒，无菌水冲洗1次后再用0.1%的升汞浸泡8分钟，用无菌水冲洗5-8 次，材料灭菌后应立即取出，然后放在无菌纸上沥干，留待接种。

1.2.2 一次成苗初代培养基的筛选

1.2.2.1 基本培养基使用MS 和1/2MS，分别添加0.3mg/L、0.5mg/L、0.7mg/L 的NAA 与1mg/L、3mg/L、5mg/L 的6- BA，在此基础上添加香蕉泥100g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5g/L，pH 值为5.8。

1.2.2.2 将所有的组培苗放在光照强度为2000Lx，温度为（25±2）℃的培养室里，35d 后统计不定芽的诱导率。

1.2.2.3 不定芽的诱导率（%）= 诱导出芽苗数/ 未污染的接种数，统计并作好记录，从而筛选出一次成苗的最适培养基。

表1 不同的培养基对成苗的影响

2 结果

2.1 试验结果表明，基本培养基为1/2MS 的铁皮石斛组培苗不定芽的诱导率普遍比基本培养基为MS 的不定芽诱导率高，且长势普遍良好，比基本培养基为MS的组培苗效果更加明显，诱导的不定芽更多，更加壮实。

2.2 基本培养基为1/2MS 的铁皮石斛组培苗明显长势普遍更佳，组培苗的不定芽数更多，不定芽长得更加健壮。

2.3 培养基中不同浓度的激素含量对组培苗的不定芽的生长诱导及促进有一定程度的差异。

2.4 从整体来看，培养基中的激素NAA 对铁皮石斛组培苗不定芽诱导与生长的影响随着其浓度的增高而逐渐开始抑制，由此可见选取合适的培养基激素浓度对组培苗不定芽的增殖有显著的促进作用。

2.5 铁皮石斛一次成苗的最适培养基配方为：1/2MS+ 蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+ 香蕉泥100g/L+NAA 0.5mg/L+ 6- BA3mg/L，pH 值为5.8，这一培养基最利于铁皮石斛组培苗不定芽的诱导与生长。

3 讨论

3.1 石斛一直被认为是中药中的上品，已在临床上及中药复方中被广泛应用，同时具有极高的观赏价值，在国际花卉市场上占有重要的地位，作为濒临灭绝的受保护中药品种之一，市场售价较高。简化铁皮石斛组培种苗培育的流程，将其投入大规模的工厂生产可大大降低成本，缩短种苗的繁育时间，以期推动铁皮石斛的产业化进程。